上海申安医疗器械厂  LDZX-50KBS 压力蒸汽灭菌器 消毒锅
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微生物实验室压力蒸汽灭菌质量控制

[导读]目的: 提高实验室灭菌工作水平, 保证压力蒸汽灭菌的效果, 为微生物实验室检验工作提供质量保障。方法: 按照压力蒸汽灭菌质量控制作业指导书的要求, 对压力蒸汽灭菌工艺进行初始验证, 开展常规灭菌效果监控。

压力蒸汽灭菌技术是目前公认的最可靠的灭菌技术之一, 具有灭菌温度高, 灭菌效果可靠, 易于掌握和控制等优点,是微生物实验室用于培养基、废弃物等灭菌的最常用灭菌方法。为了做到灭菌工作的程序化和规范化, 保证压力蒸汽灭菌的质量, 我们制订了压力蒸汽灭菌质量控制作业指导书, 并在实际工作中切实加以实施, 通过二年多的运行, 取得良好的效果, 现报告如下。
1 材料与方法
1. 1 主要仪器和试剂
三洋MLS- 3750型实验室用高压灭菌器一台, 160e 留点温度计4支, 均经检定合格; 压力蒸汽灭菌化学指示管, 嗜热脂肪杆菌芽胞菌片( 含菌量为5134 @ 106 cfu/片), 溴甲酚紫蛋白胨水, 均为杭州致远医学检验所有限公司生产, 在有效期内使用。
1. 2 压力蒸汽灭菌质量控制作业指导书
1. 2.1 压力蒸汽灭菌基本原理 压力蒸汽灭菌是利用密闭的耐高压蒸汽灭菌器, 在蒸汽不外溢的条件下, 使锅内压力增
高, 随之蒸汽温度也增高, 大大加强其杀菌效力。在01105MPa /cm2 蒸汽压力下, 温度达到1211 3e , 维持15 ~20 m in, 可杀灭包括细菌芽胞在内的所有微生物。
1.2.2 压力蒸汽灭菌过程中的注意事项
1.2.2. 1 合理计算灭菌时间: 灭菌全过程应包括冷空气排除时间、热力穿透时间、灭菌温度维持时间、排气时间。
1.2.2. 2 灭菌物品的包装和容器: 盛装培养基的容器直径不超过10 cm, 容量不超过500 m ;l 使用具有通气性的盖罩。
1.2.2.3 灭菌物品的合理布放: 不得将温度传感器孔堵塞; 灭菌物品装载容量不得超过桶内容量的80%。
1.2.2.4 安全操作: 仔细阅读说明书, 严格按照操作程序操作。
1.2.3 灭菌器具物理性状检查 每次灭菌操作前和灭菌中均需对灭菌器进行检查。
1.2.3.1 密封性检查: 桶盖开合是否自如, 硅硐胶的盖子衬垫有否老化、破损, 盖紧后应不漏气。
1.2.3.2 冷空气排放部件检查: 排气管连接完好无阻塞、破损和脱落; 排气管与排气贮存桶连接紧密不漏气, 关紧贮存桶盖罩。

1. 2.3.3 仪表计量检查: 仪表有否经过计量检定, 指示的温度与压力是否能相对应。
1.2.3.4 压力表、数显部件应清晰完好, 接通电源后, 数显及程序设定正常; 达到设定温度时, 温度和压力是否会保持恒定, 温控灵敏度应[ 1e 。
1.2.4 灭菌工艺验证 初次投入使用前, 经过大修或调试后,均应进行灭菌工艺的验证程序。
1.2.4.1 温度验证: ¥ 取1000、500、250 m l三角烧瓶各1只,分别加入800、400、200 m l 生理盐水; 取中试管4 支, 各加入5 m l生理盐水和1支压力蒸汽灭菌化学指示管。¦ 将3支装有指示管的中试管和3支留点温度计分别悬置于3只三角烧瓶中心位置(试管浸入三角烧瓶中的盐水中, 不能偏斜) , 三角烧瓶用棉塞塞住, 盖上二层牛皮纸, 用线扎紧。将另1 支留点温度计放入另1支中试管中。将上述三角烧瓶和中试管置于灭菌桶内, 设定121e 20 m in; 灭菌桶内灭菌物品的装载容量与常规灭菌时相同, 约为70%左右。¨ 灭菌完毕冷却后观察: 留点温度计应指示121e ; 化学指示管内的药片完全熔化,表示容器内温度达到121 并能持续20 m in, 如不完全熔化,则应增加设定时间, 重新试验, 直至完全熔化为止。
1.2.4.2 灭菌效果验证: ¥ 取1000、500、250 m l三角烧瓶各1只, 分别加入800、400、200 m l生理盐水; 取6支内装5 m l溴甲酚紫蛋白胨水的中试管, 在4支中试管中各加入1片嗜热脂肪芽胞菌片, 另2支不加菌片(对照管), 各用棉塞塞住试管口。将3支加入菌片的中试管分别悬置于3只三角烧瓶中心位置, 三角烧瓶用棉塞塞住, 盖上二层牛皮纸, 用线扎紧。
将上述三角烧瓶和中试管置于灭菌桶内, 设定121e
15 m in, 灭菌桶内灭菌物品的装载容量约为70%左右。灭菌完毕冷却后, 取出中试管, 2支对照试管中, 1 支加入1片嗜热脂肪芽胞菌片, 作为阳性对照, 另1 支作为阴性对照。将6支中试管置54度+ 1度 条件下培养48 h。© 结果观察和判定: 阴性对照和阴性结果: 无菌生长, 液体清晰, 培养基不变色。阳性对照和阳性结果: 有菌生长, 液体混浊, 培养基紫色变为黄色。阳性对照管和1000 m l三角烧瓶中试管应有菌生长, 阴性对照及其余3支试管应无菌生长为灭菌合格, 否则为灭菌不合格。ª 重复上述操作, 温度不变, 设定时间分别为20、21、22 m in,, 直至灭菌合格为止。记录结果。
1.2.4.3 灭菌工艺确定: ¥ 以上述检测结果显示灭菌合格的最低时间为基准, 连续进行3次灭菌效果检测, 3 次检测结果均合格方为有效。论证确认: 以上述3 次灭菌均合格的灭菌温度和时间确定为常规灭菌工艺。
1. 2.5 常规灭菌效果监控 灭菌工艺确认之后, 应按其确定的灭菌工艺进行压力蒸汽灭菌操作。同时在日常灭菌中, 进行常规的灭菌效果监测。
1. 2.5.1 温度监测: 灭菌前将留点温度计和化学指示管(装入内装5 m l生理盐水的中试管内) 放入灭菌器内物品的中心部位( 最难灭菌处, 如悬置于装培养基的三角烧瓶中心) , 灭菌完毕后取出, 留点温度计指示121e , 化学指示管内药片完全熔化为灭菌合格。
1.2.5.2 生物监测: 同1.2. 4. 2中 。通常情况下每月进行一次, 特殊情况下视情况而定, 可随时进行。

2 结果
2.1 压力蒸汽灭菌工艺验证

2.1.3 论证确认 经试验, 在灭菌器桶内装载容量为70%时, 对盛装于500 m l三角烧瓶的培养基, 121度 23 m in 能达到灭菌效果, 该压力蒸汽灭菌器对盛装于500 m l三角烧瓶培养基的灭菌工艺确定为121度 23 m in。
2.2 常规灭菌效果监控
2.2.1 温度监测结果 2006. 8~ 2008. 10共进行252次监测,留点温度计检查合格率100.0%, 化学指示剂监测合格247次, 合格率为981. 0%。
2.2.2 灭菌效果监测结果 共进行25 次监测, 合格率为100.0%。
3 讨论
在许多基层微生物实验室, 既没有供应室, 也没有专门的消毒灭菌人员, 实验中所用的培养基及其它实验材料的消毒灭菌工作由实验人员承担。因此, 在建立和健全压力蒸汽灭菌质量管理程序、做到灭菌工作程序化和规范化的同时, 应重点加强对实验室全体人员的灭菌知识和质量控制知识培训,使从事灭菌的操作人员能熟知压力蒸气灭菌的相关知识及操作程序和质量控制程序。这是保证灭菌质量的前提条件。微生物实验室所用的培养基, 按照培养基生产厂家提供的说明, 大多采用压力蒸气灭菌, 通常对无糖培养基是121度15 m in, 对含糖培养基是115度20 m in, 在实际应用中能否达到灭菌效果, 必须经过验证。我们对本实验室使用的高压灭菌器进行的灭菌工艺初始验证结果显示: 在70%装载容量时,对盛装于500 m l三角烧瓶的培养基, 121度 23 m in 能达到灭菌效果。说明我们不能简单地按说明书的要求进行灭菌。压力蒸气灭菌中, 当灭菌箱内温度达到灭菌温度后, 培养基整体达到灭菌温度具有一段滞后时间, 所以, 灭菌设定时间应等于灭菌时间+ 滞后时间。据此原理, 灭菌桶内的装载容量不同, 盛装培养基的容器大小不同, 灭菌设定时间也应不同, 较少装载容量的培养基灭菌时, 灭菌器桶内温度迅速升高, 滞后时间延长; 盛装在较大容器中的培养基, 因热穿透时间较长, 滞后时间也延长。本实验结果显示: 在桶内装载容量为70%、灭菌温度为121e 时, 对盛装于500、250 m l三角烧瓶和中试管中的培养基, 达到灭菌效果所需的时间分别是23、22和20 m in。
通过二年多的灭菌效果监控, 留点温度计和生物监测的合格率均达到了100. 0%, 化学指示剂的监测合格率为98.0%, 说明我们所实施的质量管理措施效果显著。5次化学指示剂监测不合格, 事后检查原因, 均因灭菌器内培养基的装载容量较少, 灭菌设定时间没有延长, 而达不到灭菌效果。灭菌器的灭菌性能随灭菌物品的种类、数量、装载方法和容器种类等的不同而发生变化, 根据GB /T27405- 20085实验室质量控制规范(食品微生物检验) 6规定, 应对实际应用的每个运转循环和每一种装载状态时的性能进行初始验证, 确定灭菌条件, 确保达到灭菌效果。
综上所述, 对灭菌工艺进行初始验证, 并进行常规的灭菌效果监控, 能及时发现灭菌工作中存在的问题, 便于及时整改, 确保灭菌质量, 从而提高实验室的检验工作质量。

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